細(xì)胞凍存是將細(xì)胞儲存在低溫環(huán)境中集聚，減少細(xì)胞代謝建設，實現(xiàn)長期儲存的一種技術(shù)在此基礎上。在大多數(shù)細(xì)胞系中，細(xì)胞會隨著衰老和演化不斷的積累改變前來體驗，造成表型和基因型的“培養(yǎng)漂移”自主研發，在凍存過程中，適當(dāng)?shù)牟僮骱秃线m的凍存條件可以減少細(xì)胞特性的改變或丟失更加廣闊，起到細(xì)胞保種的作用損耗。

　　細(xì)胞凍存的前期工作有哪些

　　正確的培養(yǎng)和溫和的細(xì)胞收集

　　在凍存前，細(xì)胞應(yīng)保持最佳的生長狀態(tài)(處于對數(shù)期或指數(shù)期)非常完善，理想情況下性能穩定，培養(yǎng)基應(yīng)在收獲前24h更換。建議對培養(yǎng)物進(jìn)行微生物污染物檢測作用，特別是支原體情況正常，確保細(xì)胞沒有任何的污染行業分類。在細(xì)胞的收集過程中，實驗操作要盡可能的溫和醒悟，避免細(xì)胞受損數據顯示。

　　適當(dāng)?shù)牡蜏乇Ｗo(hù)劑

　　目前，細(xì)胞凍存常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法也逐步提升，主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞記得牢，減少在冷凍過程中對細(xì)胞的損害。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接凍存重要的作用，細(xì)胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶更多可能性，從而引起一系列不良反應(yīng)。

　　聚乙烯基吡咯烷酮反應能力、乙二醇共謀發展、甲醇和甲基乙酰胺等都是低溫保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中最常見的是二甲基亞砜(DMSO)和甘油結構重塑，這兩種物質(zhì)分子量小聽得懂，溶解度大，易穿透細(xì)胞高質量發展，可以使冰點下降全方位，提高細(xì)胞膜對水的通透性，關(guān)鍵在于對細(xì)胞無明顯毒性影響力範圍。DMSO通常濃度為5 - 10% (v/v)大局，最佳濃度隨細(xì)胞系的不同而不同。甘油在冷凍介質(zhì)中的最終濃度為5 - 15%邁出了重要的一步，同樣有序推進，最佳濃度取決于細(xì)胞系。為了提高較難保存的細(xì)胞的存活率需求，凍存時可以選擇增加保存液中的血清濃度堅定不移。想要凍存細(xì)胞更快更穩(wěn)，細(xì)胞凍存液會是不錯的選擇真諦所在，無需配制指導，直接在細(xì)胞中加入適量的凍存液即可，操作簡單充分，就能擁有高活率的細(xì)胞。

　　緩慢的凍存速度

　　慢速凍存對細(xì)胞活力的恢復(fù)是非常重要的集聚。對大多數(shù)動物細(xì)胞競爭力，每分鐘降低-1到-3℃能讓細(xì)胞更好適應(yīng)凍存狀態(tài)。目前大多數(shù)實驗室常用的方法是梯度降溫法：在4℃放置30 min狀況，再轉(zhuǎn)入-20℃存放 2h機製性梗阻，接著轉(zhuǎn)入-80℃冰箱冷凍過夜機製，次日將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮罐中長期保存。一款可重復(fù)使用的細(xì)胞凍存盒集成應用，可省去多次反復(fù)轉(zhuǎn)移細(xì)胞的時間探討，將準(zhǔn)備好的細(xì)胞凍存管放進(jìn)凍存盒，直接在-80℃過夜后就可以轉(zhuǎn)移至液氮罐中高效流通。無論使用哪種凍存方法明確相關要求，重要的是在轉(zhuǎn)移存放位置的過程中一定要迅速，轉(zhuǎn)移時建議將凍存管放在干冰中恒溫統籌發展，盡量避免轉(zhuǎn)移過程因溫度變化對細(xì)胞活力的影響深化涉外。

　　持續(xù)的低溫儲存

　　細(xì)胞溫度應(yīng)始終保持在-130℃以下，才能達(dá)到最佳存活率生產製造。如果存放溫度控制不好開展試點，存活率會隨著時間的推移而降低。建議將細(xì)胞在液氮條件下長期保存共同，需要定期人工檢查液氮罐的密閉性和液氮量是否充足推進一步，避免因儲存條件造成細(xì)胞的損毀。